多重 PCR 与多基因检测场景:同时扩增多个靶基因(如病原体分型、遗传标记检测),需平衡不同引物对的退火温度。例:在 HPV 分型检测中,使用梯度 PCR 优化 14 种型别引物的共同退火温度,避免因单一温度导致部分型别漏检。 科研方法开发与验证场景:建立新的 PCR 检测方法(如巢式 PCR、实时荧光定量 PCR 的预实验)时,需系统优化温度、时间、酶浓度等参数。例:开发某**突变基因的检测方法时,通过梯度功能同时测试 3 个不同退火温度和 2 种酶浓度组合,共 6 种条件,快速确定比较好反应体系。RePure-A的技术实力在不断更新,科研人员在复杂研究中能获得可重复、可靠的实验数据,从而加快科研进程。无锡32孔基因扩增仪PCR仪经销商
引物设计与条件优化场景:新引物开发时,需测试不同退火温度(Tm 值)以避免非特异性扩增。例:针对某基因设计 5 对引物,通过梯度 PCR 同时测试每对引物在 55℃~65℃范围内的比较好退火温度,直接筛选出特异性条带**亮的组合。优势:传统方法需多次**实验,梯度 PCR *需 1 次运行即可完成多条件验证。复杂模板的扩增优化场景:扩增富含 GC 碱基对(>70%)的模板、长片段 DNA(>5kb)或存在二级结构的序列时,需精细优化温度参数。例:扩增某病毒全基因组(约 15kb)时,通过梯度功能测试不同延伸温度(如 68℃~72℃)对产物完整性的影响,确定比较好延伸条件。江苏定量基因扩增仪PCR仪厂家供应RePure-(D)B梯度功能的应用可有效减少实验中的试错次数,节省实验时间。
仪器操作设置放置样品板:将密封好的 96 孔板平稳放入 qPCR 仪的样品槽,确保孔位对齐,盖紧仪器舱门。程序设置(通过仪器软件):预变性:通常 95℃,30 秒 - 5 分钟(热启动酶,使模板完全变性)。循环阶段(变性→退火→延伸,同时采集荧光):变性:95℃,5-15 秒(使 DNA 解链)。退火 / 延伸:根据引物 Tm 值设置温度(一般 55-65℃),20-30 秒(引物结合并延伸,荧光染料 / 探针在此阶段发光)。循环次数:通常 35-40 次(根据模板浓度调整)。溶解曲线(可选):用于验证扩增产物特异性,程序为 95℃ 15 秒→60℃ 1 分钟→缓慢升温至 95℃,同时连续采集荧光(观察是否有单一峰,排除非特异性扩增或引物二聚体)。荧光通道选择:根据使用的荧光染料 / 探针类型选择(如 SYBR GreenⅠ 对应 FAM 通道,TaqMan 探针根据标记荧光选择)。样本信息录入:在软件中标记样品类型(如标准品、未知样本、阴性对照、空白对照)及孔位对应关系。
样本采集:根据检测对象不同,采集具有代表性的样本。对于农作物,需从不同部位如叶片、种子等采集适量样品;对于加工食品,要考虑其成分复杂性,尽可能从多个部位或不同包装中取样,确保样本能多方面反映被检物的情况。样本粉碎:采集后的样本若为固体,需进行粉碎处理,以便后续提取核酸。可使用研磨仪、粉碎机等设备将样本粉碎成均匀的粉末状,增加核酸提取的效率和均匀性。核酸提取:利用核酸提取试剂盒或相关提取方法,从粉碎的样本中提取 DNA 或 RNA。常见的方法有 CTAB 法、SDS 法等,提取过程需严格按照操作说明进行,以保证提取的核酸纯度和完整性。核酸定量与质量检测:采用核酸定量仪,如分光光度计、荧光定量仪等,对提取的核酸进行定量分析,确定其浓度和纯度。同时,通过琼脂糖凝胶电泳检测核酸的完整性,确保核酸无降解,满足后续 PCR 检测要求。RePure-(D)B双槽PCR是一款专业、高效的PCR仪器,具有双槽设计,可同时进行两组PCR反应,提高实验效率。
精细识别:PCR 技术可针对转基因成分中特定的基因序列设计引物,如启动子、终止子、目的基因等独特的 DNA 碎片。这些引物能够精细地与目标基因序列结合,只对转基因成分中的特定片段进行扩增,而不会对其他非目标基因或生物体的 DNA 产生作用,从而实现对转基因成分的精细检测,有效区分转基因和非转基因样本。避免误判:引物与目标基因之间的特异性结合是基于碱基互补配对原则,具有高度的精确性。只要引物设计合理,就能准确地识别并结合目标转基因序列,极大地降低了误判的可能性,提高了检测结果的可靠性。RePure系列PCR仪采用了梯度温控技术,能够在实验中准确调节温度梯度,可以轻松地优化PCR反应条件。江苏荧光基因扩增仪PCR仪一般多少钱
RePure-A凭借其紧凑的结构,能够有效节省实验室的占用空间,提升实验室的整体布局效率。无锡32孔基因扩增仪PCR仪经销商
转基因作物检测应用:扩增转基因作物中的外源基因(如抗虫基因Bt、抗除草剂基因EPSPS),用于安全性评估和监管筛查。案例:欧盟法规要求对食品中的转基因成分进行 PCR 定性检测。2. 作物育种与品种鉴定应用:利用 SSR(简单序列重复)、AFLP(扩增片段长度多态性)等分子标记技术,辅助选育抗病、抗逆品种,或鉴定种子纯度。案例:通过 PCR 扩增特定品种的特征性 DN**段,区分杂交种与常规种。3. 畜禽疫病检测应用:检测动物病原体(如非洲猪瘟病毒、禽流感病毒)的核酸,用于疫病防控和检疫。无锡32孔基因扩增仪PCR仪经销商