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细胞成分的提取步骤有哪些?

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2025-05-10

二、成分提取 1. 初步分离 离心:低速离心(如500-1000×g,5分钟)去除未破碎的细胞碎片;高速离心(如10,000×g,15分钟)分离细胞器(如线粒体、细胞核)。 过滤:用滤膜(如0.22μm或0.45μm)去除大颗粒杂质。 2. 目标成分纯化 蛋白质提?。? 使用裂解液(含去垢剂、盐和缓冲液)溶解蛋白。 离心后收集上清液,通过亲和层析(如His标签纯化)、沉淀法(如硫酸铵沉淀)或电泳分离。 核酸提?。? DNA:酚-氯仿抽提去除蛋白质,乙醇沉淀纯化。 RNA:TRIzol法提取,注意避免RNase污染。 细胞器分离: 差速离心或密度梯度离心(如蔗糖梯度)分离线粒体、叶绿体等。 代谢物提?。? 有机溶剂(如甲醇、乙腈)萃取,或冷冻干燥后溶解。 3. 浓缩与保存 浓缩:超滤离心管、冻干或真空浓缩。 保存:分装后低温保存(-20℃或-80℃),避免反复冻融。

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