沙土保藏法（1）取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。（2）倒去酸水，用自来水冲洗至中性。（3）烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。（4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。（5）烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。（6）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。（7）抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。（8）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好）优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。（9）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。（10）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。（11）每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长。 微生物菌剂在改善土壤理化性质方面发挥积极作用。莲藕用微生物菌剂

    菌剂、菌肥较大的区别在于产品中营养物质及有机物料的含量，使用中需结合实际需求选择对路产品。误区3：认为一种产品中菌的种类越多、菌种数量越大越好复合菌剂的使用效果会受到不同菌种生长习性的影响，盲目的复合，极易造成菌种间的拮抗，影响效果发挥。产品使用后起作用的只有活菌，因此菌衡量的标准为“有效活菌数（CFU）”，有效活菌数量越大效果越好。此外，菌的纯度也至关重要，当产品中霉菌杂菌数及杂菌率超标时也会影响应用。市场上少数不合格产品中含有致病菌，不仅修复不了土壤，还会导致病害发生。误区4：一个季节使用一次就可以，一次使用作用可持续多年部分微生物菌种施入土壤后会大量繁殖，当数量达到一定程度后成为优势菌群，但外部环境的改变会导致有益菌死亡，从而影响有益菌群在土壤微生物系统中的地位，要继续保持其地位，就需要在作物的生长期多次使用微生物肥料来补充有益菌。误区5：不注重菌的种类，认为一种菌可以解决多种问题少数用户缺乏对症用菌的意识，选购产品时只注重是否含菌，而不关注菌的种类，使用不对症的菌品种后，达不到所需目的。对于现阶段在农业部获得登记的微生物品种，它们具有不同的功能。官方微生物菌剂出厂价微生物菌剂助力作物根系扩展，增强吸收能力。

    -50—-80℃、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。器材细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。操作步骤各保藏法的应用范围及优缺点下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

    不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。3．滤纸保藏法（1）将滤纸剪成0．5×1．2cm的小条，装入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2张，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟。（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。（3）取灭菌脱脂牛乳1—2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。（6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保存于低温下。（7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。细菌、酵母菌、丝状真“菌”均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真“菌”甚至可保藏14—17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。 微生物菌剂富含活性菌，有效改善土壤微生物环境，促进作物生长。

生物菌肥是一种利用菌类进行发酵以提高农业生产效益的农业生产技术，生物菌肥施用的效果和季节关系密切，下面我们来具体探讨一下生物菌肥的施用季节及其效果。春季是农作物生长的重要季节，施用生物菌肥可以增强土壤中菌类的活性，改善土壤环境，调节土壤温度、湿度等因素，有利于农作物的根系生长和吸收。同时，春季气温较低，土壤生物代谢缓慢，施用生物菌肥可以促进土壤菌群的活性，提高土壤肥力。另外，春季是农作物播种、移栽的季节，生物菌肥可增加土壤有机质含量和有益微生物数量，提高土壤肥力。综上所述，春季适当施用生物菌肥，可以促进农作物生长，提高产量。微生物菌剂中的微生物能够分泌有机酸，促进土壤矿物质的溶解。莲藕用微生物菌剂

微生物菌剂在促进作物生长和产量提高方面效果明显。莲藕用微生物菌剂

    乳酸菌还能够抑制连作障碍产生的致病菌增殖。酵母菌群：合成促进根系生长及细胞分裂的活性化物质，促进其它有效微生物增殖所需要的基质（食物）提供重要的给养保障。凝结芽孢杆菌：可降低环境中的氨气、硫化氢等有害气体。提高果实中氨基酸的含量。米曲霉：使秸秆中的有机质成为植物生长所需的营养，提高土壤有机质，改善土壤结构。分解蛋白质、纤维素、半纤维素、木质素等，并将嗜热、耐热细菌、真“菌”、酵母菌菌株及相关分解酶复合而成，降解能力强，同时能够达到升温、除臭、消除病虫害、杂草种子和提高养分的效果。黑曲霉：裂解大分子有机物和难溶无机物，便于作物吸收利用，改善土壤结构，增强土壤肥力，提高作物产量。绿色木霉：是所产纤维素酶活性比较高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，同时又是一种资源丰富的拮抗微生物，具有保护和治“疗”双重功效，可有效防治土传性“病”害。哈茨木霉：用来预防由腐霉菌、立枯丝核菌、镰刀菌、黑根霉、柱孢霉、核盘菌、齐整小核菌等病原菌引起的植物病害。淡紫拟青霉：对多种线虫都有防治效能，是防治根结线虫有前途的生防制剂。莲藕用微生物菌剂